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檢測間精度顯示不同日期進(jìn)行的檢測間重現(xiàn)性。檢測間精度通常為< 10%。這確保獲得的結(jié)果隨著時間的推移和試劑盒之間保持一致。以下是為檢測間精度生成和報告的典型數(shù)據(jù)示例。在該示例中， 使用 Invitrogen 淀粉樣蛋白 β 42 人 ELISA 試劑盒在多天內(nèi)檢測三份樣品，共檢測 36 次。結(jié)果顯示變異系數(shù)小于 10%，從而證明了檢測間良好再現(xiàn)性。

線性是相對于基于標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析物計算量來定義。樣品中分析物的最終計算濃度應(yīng)與檢測定量范圍內(nèi)的任何稀釋濃度相同。開發(fā)完善的免疫檢測試劑盒可最大限度地減少不同樣品基質(zhì)和其他可能干擾的因素的潛在影響。稀釋線性驗證實驗提供了關(guān)于在不同稀釋水平下測試的樣品結(jié)果精度的信息。對每種經(jīng)驗證樣品類型進(jìn)行稀釋線性測試，如果結(jié)果是每種稀釋預(yù)期濃度的 70%-130%，則視為良好。線性對于在測定的動態(tài)范圍內(nèi)準(zhǔn)確測量分析物濃度非常重要，可使用公式計算：

% 線性度 = (稀釋后測量濃度 / 預(yù)期濃度) x 100

特定樣品類型的稀釋線性度通常如下表所示。在該示例中， 使用 HeLa 細(xì)胞裂解物評價 Invitrogen c-Myc (總) 人 ELISA 試劑盒。在檢測的動態(tài)范圍內(nèi)，用試劑盒隨附的標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液稀釋 HeLa 細(xì)胞裂解物。測量值與預(yù)期值顯示出良好的檢測線性，并且沒有來自樣品基質(zhì)的明顯干擾。

HeLa 細(xì)胞在 37°C 下，含有 10% 胎牛血清 (FBS) 的 DMEM 中生長，并用 細(xì)胞提取緩沖液裂解，并進(jìn)行超聲處理。將該裂解物在標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液中稀釋至檢測范圍，并測量 c-Myc（總量）。檢測結(jié)果與預(yù)期濃度的線性回歸檢測產(chǎn)生的相關(guān)系數(shù)為0.99。

回收率用于確定分析物檢測是否受樣品基質(zhì)差異的影響。基質(zhì)（如血清和血漿）可能具有干擾因素，影響 ELISA 準(zhǔn)確定量分析物的能力。

通過將已知量的分析物加標(biāo)到不同樣品基質(zhì)中來驗證回收率。進(jìn)行檢測并確定回收率。通常，如果平均回收率為 80%-120%，則認(rèn)為樣品基質(zhì)對檢測準(zhǔn)確定量分析物的能力影響最小。 

右表是用于報告回收率的典型格式。在該示例中，   檢測了 Invitrogen 脂聯(lián)素人 ELISA 試劑盒在 5 份不同血漿樣品中的回收率。 

靈敏度定義為可與背景區(qū)分的最低分析物水平。這通常稱為分析靈敏度或檢測限。通過將零標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)獲得的平均 O.D. 加上 2 個標(biāo)準(zhǔn)偏差來確定靈敏度。

例如， Invitrogen Tau (磷酸化) [pT181] 人 ELISA KI 靈敏度 <為 10 pg/mL。這表明測試的每個試劑盒批次的靈敏度均低于 10pg/mL。用于報告 ELISA 測定靈敏度的典型規(guī)格是 " 人 Tau [pT181] <的最低檢測濃度為 10 pg/mL。這通過零標(biāo)準(zhǔn)檢測 64 次時獲得的平均 O.D. 加上兩個標(biāo)準(zhǔn)偏差來確定。

進(jìn)行特異性測試以驗證檢測到的目標(biāo)分析物與其他密切相關(guān)的分子未發(fā)生交叉反應(yīng)。交叉反應(yīng)可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果或不準(zhǔn)確定量。為了確保僅識別所需的分析物，對一組其他物質(zhì)進(jìn)行交叉反應(yīng)性測試。

例如， 通過篩選 20 種不同物質(zhì)的交叉反應(yīng)性，對 Invitrogen IL-6 小鼠 ELISA 試劑盒的特異性進(jìn)行了檢測。用于報告 ELISA 特異性結(jié)果的典型格式是 " 使用 IL-6 小鼠 ELISA 試劑盒檢測了一組 10 ， 000 pg/mL 的物質(zhì)的緩沖溶液。 1β γ 檢測后發(fā)現(xiàn)無交叉反應(yīng)性：小鼠 IL-1 β ， IL-2 ， IL-4 ， IL-10 ， IFN- β ， TNF- α ；大鼠 1β IL-1 β ， IL-2 ， IL-4 ， IL-6 ， IFN- γ ， TNF- α ；人 IL-2 ， IL-4 ， IL-6 ， IL-10 ， IL-12 ， IFN- γ ， TNF- α ；豬 IL-8

ELISA 的生產(chǎn)過程涉及高質(zhì)量生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，以確保高質(zhì)量 ELISA 試劑盒的一致生產(chǎn)。基本因素包括—嚴(yán)格的文檔和記錄保存，人員培訓(xùn)，質(zhì)量控制程序，設(shè)施和設(shè)備維護(hù)，關(guān)鍵流程的驗證，原材料控制，可追溯性，環(huán)境監(jiān)測，變更控制， 和符合監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)。 

1. 使用符合制造商建議范圍內(nèi)的正確移液器

2. 確認(rèn)吸頭已牢固地插與移液器上

3. 確認(rèn)移液時沒有氣泡

4. 在每個標(biāo)準(zhǔn)品，樣品或試劑之間更換吸頭

5. 每種試劑使用不同的儲液槽

6. 將樣品吸取到孔的側(cè)面，避免飛濺

7. 始終進(jìn)行樣品 / 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)孔設(shè)置

1. 通過將吸頭輕輕地降低到每個孔底部，完全吸液所有孔中的液體。    備注：小心操作，不要劃傷孔內(nèi)側(cè)。

2. 用至少 400 μ L μL 的洗滌緩沖液填充孔

3. 浸泡 15 到 30 秒

4. 從孔中吸出洗滌緩沖液

5. 按照提示重復(fù)方案 (通常 3-4 次)

6. 清洗完成后，翻轉(zhuǎn)孔板并在吸水組織上輕敲 (必要時用力) 干燥。確保清除所有殘留的液體。

7. 或者，也可使用洗瓶或自動洗板機(jī)。請務(wù)必 遵循上述內(nèi)容。

實驗步驟

1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

注意事項劑盒的儲存

1. 未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

2. 使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

須知：

試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在驗后1個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。

DUMABIO ELISA檢測試劑盒

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