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本試劑盒僅供研究使用檢測范圍：1.56 pg/ml - 100 pg/ml檢測限：0.39 pg/ml特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人1,25-（OH）2D3，且與其他相關蛋白無交叉反應。期：6個月預期應用：ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中1,25-（OH）2D3含量。說明 1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。 3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。4．剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。概述1966年狄路卡等證明維生素D是一個前體激素，其活性型為1,25-二羥基維生素D3（1,25-（OH）2D3）。1,25-（OH）2D3的作用原理與經典類固醇激素一樣，涉及遺傳信息的表達。關于存在1,25-（OH）2D3受體/結合蛋白的靶組織除傳統的小腸、骨和腎臟外，還有胰、腦垂體、甲狀旁腺、乳腺、胎盤，甚至還可存在于性腺、子宮、結腸、皮膚成纖維細胞、胸腺和腮腺等多種組織。近來，發現1,25-（OH）2D3可抑制增生并降低白血病細胞分化，它可將白血病細胞分化為單核細胞/巨嗜細胞。另外，它還可抑制一系列其它惡性細胞增生，包括胸腺、前列腺和結腸癌細胞。1,25-（OH）2D3還影響激素分泌。除了影響甲狀旁腺和垂體腺激素分泌，還報道有增加胰島素分泌。此外，它還影響免疫系統，抑制T-細胞增生和細胞分裂表達。實驗原理用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗1,25-（OH）2D3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗1,25-（OH）2D3抗體、HRP標記的親和素，經過洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的1,25-（OH）2D3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 試劑盒組成及試劑配制 1. 酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔）。 2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。4. 生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。6. 生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。需要而未提供的試劑和器材1. 標準規格酶標儀2. 高速離心機3. 電熱恒溫培養箱4. 干凈的試管和Eppendof管5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器6. 蒸餾水，容量瓶等標本的采集及保存 1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。注：標本溶血會影響檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為100 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml，3.12 pg/ml，1.56 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。如配制50 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）100 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。操作步驟實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為實驗結果性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。 4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了實驗結果的性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。注：1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以檢測結果的性。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。計算以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 注意事項1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。3. 一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。5. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數。6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。7. 底物請避光保存。8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。來源：阿儀網（www.86488b.com） http://www.86488b.com/c63416/article/d32723.html

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        基于Fused-core(核殼)技術的新型5μm  HALO-5色譜柱，能極大的提高HPLC的分離能力。相對于常規色譜柱來說，HALO-5具有以下幾個特點：

^具有市售5μm色譜柱中最高的塔板數（>150000plates/m）

^產生和常規3μm色譜柱相當或更好的柱效，但是柱子的反壓低了近一半

^由于和2.7μm HALO色譜柱具有相似的多孔殼層結構，高流速下依然具有高柱效，具有很好的重復性

^低的反壓使其可以很好的適用于常規HPLC系統

^是UHPLC分離方法的擴展

HALO-5填料特性

固定相基質

       ^超純，B型硅膠

       ^0.6μm的多孔硅殼熔融于3.8μm實心核上

       ^90m2/g比表面積（相當于150-200m2/g多孔硅膠）

       ^90?的孔徑

鍵合相

      ^C18、RP Amide、PFP、Peptide ES-C18(多肽專用)、Phenyl-Hexyl、ES-CN、HILIC、Penta HILIC多種鍵合相可選擇

       ^完全封端

       ^ph范圍：2-9

       ^最高使用溫度60

       ^最大壓力：9000psi,600bar

○ 額定絕緣電壓800V ○ 額定電流6A-2000A ○ 設計合理、安全、體積小、重量輕 ○ 附件齊全、安裝便捷 用途     WCM5系列塑料外殼斷路器適用于交流50Hz和60Hz，額定絕緣電壓800V、最大額定工作電壓690V、額定電流6～2000A的低壓電網中。一般作配電用，殼架額定電流400A及以下的斷路器亦可作為保護電動機之用。配電用斷路器在配電網絡中用來分配電能且作為線路及電源設備的過載和短路保護。保護電動機用斷路器在400V配電網絡中用作鼠蘢型電動機的起動和運轉中分斷及其過載和短路保護。     WCM5系列斷路器可加裝欠電壓脫扣器、分勵脫扣器、輔助觸頭、報警觸頭、電動操作機構及旋轉操作手柄機構，其用途如下： ○ 欠電壓脫扣器用作線路及電源設備的欠電壓保護； ○ 分勵脫扣器用作遠距離控制斷路器斷開之用； ○ 輔助觸頭用于對斷路器相關的控制回路和訊號回路作自動控制之用； ○ 報警觸頭用于對斷路器保護對象的過載、短路及欠電壓事故斷開報警之用； ○ 電動操作機構用作斷路器的自動控制和遠距離的閉合和斷開之用； ○ 旋轉操作手柄機構用作在開關柜門外操作斷路器及斷路器處于閉合狀態時與柜門機械連鎖之用。